基于RPA-CRISPR/Cas12a的亚麻褐斑病菌可视化检测方法的建立

高晓珂; 蒋刚强; 李鑫; 古扎丽阿依· 牙生; 田沁怡; 董经晗; 王翀; 孙燕飞; 曹文泽; 冉静; 罗明

doi:10.19802/j.issn.1007-9084.2025172

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基于RPA-CRISPR/Cas12a的亚麻褐斑病菌可视化检测方法的建立

遗传育种·生物技术 | 更新时间：2026-10-31

- 基于RPA-CRISPR/Cas12a的亚麻褐斑病菌可视化检测方法的建立
- Establishment of a visual detection method for Mycosphaerella linicola based on RPA-CRISPR/Cas12a
- 中国油料作物学报 2026年48卷第4期页码：72-80
- 作者机构：
  
  1.新疆农业大学农学院，新疆乌鲁木齐，830052
  2.乌鲁木齐海关技术中心, 新疆乌鲁木齐，830013
  3.大连海关技术中心，辽宁大连，116000
  4.石河子大学生命科学学院，新疆石河子，832000
  5.广州海关技术中心，广东广州，510000
  6.四川国际旅行卫生保健中心（成都海关口岸门诊部），四川成都，610041
- 作者简介：
  
  高晓珂（2001- ），女，硕士研究生，主要从事植物病原菌检测研究，E-mail: 3488804187@qq.com
  王翀（1979- ），女，正高级农艺师，主要从事植物病原菌检测研究，E-mail: wchgq@126.com
  孙燕飞（1976- ），女，教授，主要从事微生物学研究，E-mail: 81711308@qq.com
- 基金信息：
  
  海关总署科研计划项目(2023HK017);新疆维吾尔自治区自然科学基金(2023D01A67)
- DOI：10.19802/j.issn.1007-9084.2025172
  中图分类号： S41-31
- 收稿：2025-08-06，
  
  纸质出版：2026-08-25
- 稿件说明：
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高晓珂,蒋刚强,李鑫等.基于RPA-CRISPR/Cas12a的亚麻褐斑病菌可视化检测方法的建立[J].中国油料作物学报,2026,48(04):72-80.

GAO Xiao-ke,JIANG Gang-qiang,LI Xin,et al.Establishment of a visual detection method for Mycosphaerella linicola based on RPA-CRISPR/Cas12a[J].Chinese Journal of Oil Crop Sciences,2026,48(04):72-80.
高晓珂,蒋刚强,李鑫等.基于RPA-CRISPR/Cas12a的亚麻褐斑病菌可视化检测方法的建立[J].中国油料作物学报,2026,48(04):72-80. DOI： 10.19802/j.issn.1007-9084.2025172.

GAO Xiao-ke,JIANG Gang-qiang,LI Xin,et al.Establishment of a visual detection method for Mycosphaerella linicola based on RPA-CRISPR/Cas12a[J].Chinese Journal of Oil Crop Sciences,2026,48(04):72-80. DOI： 10.19802/j.issn.1007-9084.2025172.

摘要

亚麻褐斑病菌（

Mycosphaerella linicola

Naumov）是一种重要的检疫性病原菌，可危害亚麻整个生育期。我国每年从国外进口超10万吨亚麻籽，该病害传播扩散的风险激增，原有传统分离鉴定方法由于周期长、操作繁琐难以满足口岸快速通关需求。本研究基于RPA-CRISPR/Cas12a技术针对亚麻褐斑病菌

M. linicola

的β-微管蛋白基因Beta-Tubulin Gene (

TUB2

)序列设计RPA特异性引物和3条crRNA，筛选切割效率最佳的1条crRNA进行后续检测体系优化实验，优化实验结果表明：RPA反应适宜时间为20 min；适宜荧光报告分子浓度为50 nmol/L；适宜试纸条报告分子浓度为200 nmol/L。采用建立的检测方法对模拟带菌种子进行检测和验证，实验结果表明该体系可在种子带菌率为5%的样本中检测到100个

M. linicola

分生孢子。该方法可在80 min内完成检测，灵敏度达34 ag/μL，整个检测过程操作简便，灵敏度高，耗时短，为亚麻褐斑病菌的实时快速检测提供了技术支持。

Abstract

Mycosphaerella linicola

Naumov is an important quarantine pathogen that can damage the whole growth period of flax. China imports more

than 100 000 tons of flax seeds from abroad every year.The risk of transmission and diffusion of this disease is increasing.The original traditional separation and identification methods are difficult to meet the needs of rapid customs clearance due to their long cycle and complicated operation.Based on RPA-CRISPR/Cas12a technology

this study designed specific primers and three crRNAs for the β-tubulin gene (

TUB2

) sequence of brown spot disease of flax

and selected the one with the best cutting efficiency for subsequent detection system optimization experiments.The optimized experimental results showed that the suitable reaction time of RPA is 20 minutes.The appropriate concentration of fluorescence reporter molecules was 50 nmol/L

and the appropriate concentration of test strip report moleculars was 200 nmol/L.The established detection method was used to detect and verify the simulated fungal seed.The results showed that the system could detect 100 conidia in samples with 5% fungal seed band rate.This method can complete the detection in 80 minutes

and the sensitivity can reach 34 ag/μL. The whole detection process is simple to operate

highly sensitive and short in time

which provides technical support for the real-time rapid detection of

Mycosphaerella linicola

关键词

Keywords

references

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